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《染色质实验方案》（书评） ——Chromatin protocols 编 者：Srikumar P. Chellappan 出 版 社：Humana Press 索 书 号：Q243/C557(2)/2009/Y 藏书地点：武大外教中心
在过去的50年间，染色质的结构和功能的研究取得了长足的进展，尤其以近十年的研究成果格外激动人心。新技术的发展以及长片段DNA测序技术的实现极大地推动了DNA结构和修饰，以及与DNA相关蛋白质的研究。近十年新型分子技术的发展为染色质的细节分析提供了动力。《染色质实验方案》第二版汇集了这些对染色质结构和功能研究具有巨大推动作用的技术。 本书的第一版出版于1999年，并成为了研究染色质结构和功能的实验室的必需品。随着它的出版，染色质生物学的前景发生了巨大的变革。本书的第二版包括了非常广泛领域的技术，从核小体的分离，核小体的组装和基本染色质结构研究到组蛋白修饰细节分析和染色质功能。染色质复合物的抽提，染色质解聚分析，药物诱导的染色质早凝，重组染色质分析，染色质中DNA拓扑结构分析，独特定位单一核小体分析以及其他一些列研究染色质结构的试验方法构成了本书的起始内容。 在这部分的后面，紧接着介绍了研究染色质DNA损伤及修复的技术，监控DNA断裂技术，研究染色质转录偶联修复的详细方法，通过H2AX磷酸化实现对DNA损伤评价的技术，以及监控染色质DNA断裂的技术。研究各种药物和射线诱导的DNA损伤的技术也包括在里面，并给出了通过基因组杂交分析基因组异常的详细方法。紧随其后的是通过哺乳动物细胞抽提物在体外研究DNA复制的技术。这一技术及其变种可以用来分析DNA复制过程中组蛋白和非组蛋白的功能。 研究DNA甲基化和组蛋白修饰（包括甲基化，乙酰化，磷酸化和泛素化）的技术在后面被介绍。作为对组蛋白修饰研究的补充，各种酶（包括组蛋白去甲基化酶和去乙酰化酶）活性的分析方法也被提到。紧接着介绍了通过免疫染色研究组蛋白磷酸化的技术，这一技术改良后可以用来研究组蛋白以及与染色质相关蛋白的其他修饰。后面就是染色体免疫共沉淀技术的介绍。通过芯片分析方法可以实现对全基因组范围内进行染色质免疫共沉淀（ChIP）分析。 端粒的存在对于保护染色质完整性的重要意义和端粒酶活性的变化是如何导致细胞癌变以及其它增殖异常的研究最近受到了极大的关注。本书中介绍了该领域的两个方法，一项技术用于研究端粒酶的活性和端粒的长度，另一项技术用于研究ATM依赖的染色质修饰。 《染色质实验方案》第二版是一个研究染色质各个方面功能的科学家理想的引导工具，以帮助新技术的发展以及拓展在染色质生物学领域的新思路。
作者简介 Srikumar P. Chellappan Lee Moffitt癌症中心和研究所副教授，1987年印度理工学院获得生物和化学理学博士学位，并随后在杜克大学医学中心完成了博士后的培训。1992年至2001年在哥伦比大学内外科医生学会担任副教授。2001年加入Lee Moffitt癌症中心并担任副教授，现在担任教授。他的工作重点是了解细胞增殖的分子机制和调控机制是如何引发癌变的。他的实验室目前正在开发针对肿瘤细胞异常信号级联反应靶位点的新的抗癌药物。
目录： 前言 1 从前胚盘中提取染色质复合物的准备工作 2 利用固相途径分析重组染色质 3 体内染色质解聚分析：分子遗传分析 4 群体和单个分子中染色质结构的DNA转甲基化酶探测 5 HMGN核小体结合蛋白表的可视化 6 药物诱导的染色体早凝现象（PCC）实验方案：有丝分裂期的染色体和间期的染色质的细胞发生途径 7 酵母染色质DNA拓扑学分析 8 独特定位单一核小体分析准备 9 利用激光扫描共聚焦监控活细胞中光学突出染色质DNA断裂 10 染色质转录偶联修复研究方法 11 流式细胞仪分析DNA损伤：组蛋白H2AX磷酸化作为双链DNA损伤标志 12 利用彗星试验检测拓扑异构酶II抑制剂，伽马射线和交联剂诱导的DNA损伤 13 利用分裂中期染色体比较基因组杂交分析基因组异常 14 利用哺乳动物细胞抽提物进行体外复制试验 15 利用甲基化特定和重亚硫酸盐测序PCR分析基因组甲基化状况 16 转录中精氨酸甲基化的生物化学分析 17 体外组蛋白去甲基化分析 18 染色质转录中组蛋白作为共同激活物：乙酰化的作用 19 组蛋白去乙酰化酶活性分析 20 体内和体外组蛋白泛素化和去泛素化分析 21 通过免疫染色检测培养的细胞和组织片段中H3组蛋白的磷酸化 22 染色质免疫共沉淀：分析体内转录因子结合和组蛋白修饰 23 染色质免疫共沉淀（ChIP）芯片分析：基因组范围内转录因子结合和组蛋白修饰分析 24 Affymetrix公司平铺阵列的染色质免疫共沉淀（ChIP）芯片分析方法 25 评估端粒酶活性和端粒长度的无放射性分析方法 26 检测DNA损伤和热休克反应中ATM依赖的的染色质修饰 索引
(武汉大学生命科学学院 欧阳文杰)
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